借卵代生双胞胎

基/本/信/息

细胞名称：H9C2大鼠心肌细胞

细胞别称：H9c2(1)；H9c2；H9C2

细胞形态：成肌细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基：90%DMEM+10%FBS+PS

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

传代方法：1:2至1:每周3次

背景简介：H9c2(1)细胞是一株由Kimes·B和Brandt·B从BD1X大鼠胚胎心脏组织的克隆细胞株亚克隆得到的细胞株；H9c2(1)细胞表现出许多骨骼肌的特性。H9c2(1)细胞中的成肌细胞能融合形成多核的肌管，并对乙酰胆碱的刺激发生反应。如果培养基中的血清浓度下降到1%，H9c2(1)细胞融合发生得很快。

细/胞/形/态

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培/养/指/南

H9C2细胞复苏步骤

1.将含有1mLH9c2（1）细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4mL培养基混合均匀；

2.在1000rpm条件下离心3min，弃去上清液，加2mL培养基后轻轻吹匀；

3.将所有H9c2（1）细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中，加入约4mL培养基，培养过夜）；

4.第二天换液并检查H9C2细胞密度。

H9C2细胞传代步骤

如果H9C2细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗H9C2细胞2次。

2.加入1%%EDTA消化液于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化3min，然后在显微镜下观察H9C2细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按8mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000rpm离心4min，弃去上清液，补加2mL培养液后吹匀。

4.将H9C2细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

H9C2细胞冻存步骤

待H9C2细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例

1.收集H9C2细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000rpm条件下离心4min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，然后进行细胞计数。

2.根据H9C2细胞数量对应加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3.将冻存管放入-80℃冰箱，24h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注/意/事/项

培养基不能回收使用

1.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

细胞到货处理说明

1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系

2.观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4h。

3.收到H9C2细胞后第一次传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

细/胞/应/用

H9c2(1)是源自胚胎BD1X大鼠心脏组织的原始克隆细胞系的亚克隆，具有骨骼肌的许多特性。该细胞系可用于心血管疾病研究。

常/见/问/题

问

H9C2细胞可以传几代

H9C2细胞系理论上是可以无限传代的，但是研究发现细胞系也会有老化的；收到细胞后自己具体可以传多少代，会受到客户自己养细胞的操作水平技术，操作环境，用的试剂耗材的质量等因素影响。

问

为什么H9c2细胞培养会出现空泡

1.可能是铺板时铺得不够均匀，局部过于密集，密集地方的细胞就开始状态变差、空泡增多

2.也可能是血清差，需要更换优质血清，及时换液。

问

为什么H9c2细胞培养长得慢

这些因素都会影响细胞长得慢

1.没有保证密度，细胞长不起来，可以先培养，然后消化重新铺瓶，提高密度培养

2.操作时力度没控制好，将细胞吹碎，状态变差

3.血清质量不好，影响细胞生长

问

为什么H9c2细胞状态变差，容易漂

1.可能是血清问题，建议换血清，并注意血清要程序解冻，不能水浴化开

2.也有可能是细胞生长密集，需要及时传代，并不是细胞长满才传代，当有个别地方长得过于密集，容易叠加的时候应该就要传代了

问

H9c2细胞受体表达情况

acetylcholine,expressed

问

H9c2细胞基因表达情况

myokinase;creatinephosphokinase;myosin

问

H9c2细胞DMSO冻存比例

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配

或无血清细胞冻存液